【论著】利用荧光染料的稳定性测量精子亚细胞的功能

Sonja Grunewald, Manja Rasch, Martin Reinhardt, Thomas Baumann, Uwe Paasch, Hans-Juergen Glander（德国）

目的：评价新的基于荧光染料的临床精液分析法的荧光信号的长期稳定性。方法：用87名未经筛选的不育病人的精液进行下列检测：caspase-3的活性（n=17）、线粒体膜电压（MMP）的完整性（n=17)、磷脂酰丝氨酸的外化（EPS）（n=16)、利用CD46检测顶体的完整性（n=37）。检测结束后，在所有检测样本中加入4%多聚甲醛。用流式细胞仪分别检测加入试剂0、3、7、10天后的样本的荧光强度。结果：5%左右阳性精子的值与0天测得的值之间的差异被认为是可接受偏差。用FLICA^TM测得的Caspase-3值在第3、7、10天的平均差异小于5%。第14天的平均差异为7.6%。相比之下，受损MMP和EPS值的差异在第三天大于5%。CD46-FITC标记检测显示CD-46阳性的精子在第3、7、10和14天的绝对差异小于5%。结论：虽然建议快速分析荧光信号，但是可以延迟到第10天检测染色精子的caspase-3活力，CD46可以延迟到第14天，需要在当天用FACS分析MMP和EPS。

关键词：人精子；调亡检测；caspase-3；线粒体膜电位完整性；CD46；精液分析