【论著】附睾蛋白酶抑制剂Eppin调控精液液化的分子机制

Zeng-Jun Wang, Wei Zhang, Ning-Han Feng, Ning-Hong Song, Hong-Fei Wu, Yuan-Geng Sui （中国）

目的：研究附睾蛋白酶抑制剂Eppin调控精液液化过程中前列腺特异抗原（PSA）水解精囊蛋白（Sg）的分子机制。方法：用聚合酶链反应技术分别从精囊和睾丸cDNA文库中扩增人类Sg（核苷酸序列82-849）和Eppin（核苷酸序列70-423），克隆入表达质粒pET100D/TOPO载体，阳性克隆转化BL21(DE3)大肠杆菌，诱导重组蛋白的表达。用FarWestern免疫印迹技术和放射自显影研究Eppin与Sg的相互作用。体外实验分析重组Eppin对PSA水解Sg的影响。加入抗Eppin不同片段的抗体，研究抗体干扰精液液化的调控机制。结果：人类精子表面精囊来源的Sg结合精子表面的Eppin，C端Eppin氨基酸序列75-133是其结合位点。重组Sg可被PSA体外水解成许多分子量较小的片段。重组Eppin的加入，保护Sg分子中分子量为15000-16000kDa的片段不被PSA进一步水解，抗N端Eppin抗体的加入，不影响Eppin的作用，抗C端Eppin抗体的加入，阻断Eppin对PSA水解Sg的调控作用，被保护的片段消失。结论：Eppin通过其C端片段结合Sg的C端片段，调控PSA对Sg的水解，保护Sg分子中特异性的结合片段不被PSA水解。

关键词：附睾蛋白酶抑制剂Eppin；精囊蛋白Sg；前列腺特异性抗原