《亚洲男性学杂志》 2011; 13 (2): 266-274

《亚洲男性学杂志》 2011; 13 (2): 266-274

人精子纤维鞘内CABYR蛋白与AKAP3及Ropporin蛋白结合

Yan-Feng Li, Wei He, Arabinda Mandal, Young-Hwan Kim, Laura Digilio, Ken Klotz, Charles J Flickinger and John C Herr (中国，美国)

钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白（Calcium-binding tyrosine phosphorylation-regulated protein，CABYR) 是一种高度多态性，具有钙结合能力，可被酪氨酸以及丝氨酸/苏氨酸磷酸化并参与获能的纤维鞘蛋白。人CABYR 蛋白N末端第12-48 个氨基酸存在一个推测的表位，该表位与cAMP 依赖性PKA 的II 型调节亚单位(RII) （发挥二聚化作用及与AKAP 蛋白结合）同源，提示CABYR 可能进行自我装配及与AKAPs 家族蛋白结合。尽管已有证据显示CABYR 与AKAPs 具有有限的相互作用，但是，进一步关于CABYR 和其它纤维鞘蛋白包括AKAPs 间相互作用的新证据将有助于深入理解精子纤维鞘的基本生理学。本研究采用一种新的用于难溶性蛋白的免疫沉淀策略以及标准的免疫共沉淀方法，结合质谱分析或Western blot 探讨了CABYR 和AKAP3/ropporin 蛋白之间的相互关系。结果显示使用抗-CABYR-A 多抗可使AKAP3 与CABYR 共沉淀，反过来， 应用抗AKAP3 多抗可使CABYR 与AKAP3 共沉淀。另一种含RII 样表位的蛋白Ropporin 也可被抗-CABYR-A 多抗共沉淀，提示Ropporin 也是CABYR 蛋白的结合伴侣之一。CABYR 与AKAP3 及Ropporin 蛋白间的相互作用通过酵母双杂交分析进一步获得了证实。深入分析发现CABYR 不但通过其RII 表位和AKAP3 蛋白相结合，而且通过RII-样表位以外的其它表位与Ropporin 蛋白相结合。本研究首次证实在人精子纤维鞘内，CABYR 异构体不但可同骨架蛋白AKAP3 相结合，而且也和另外一种含RII-样结构域的蛋白Ropporin 相结合形成复合体。

关键词：AKAP3; CABYR; Ropporin; 精子; 纤维鞘; 免疫印迹