《亚洲男性学杂志》 2010; 12 (2): 196-202

慢病毒介导的SMO RNA干扰对肿瘤细胞株LNCaP和PC3 SMO基因表达、细胞增殖及细胞周期的影响

原癌基因Smoothened(SMO)是Hedgehog旁路途径的重要组成成分，具有开关该信号通路的作用。我们构建特异性沉默SMO基因(NM_005631)的重组慢病毒载体，观察其对雄激素敏感性的人前列腺癌细胞株LNCaP和雄激素非依赖性的细胞株PC3中SMO基因表达、细胞增殖、细胞周期的影响。根据SMO基因信息，设计了四个小干扰序列和一个阴性对照序列，利用慢病毒质粒载体pGCSIL-GFP构建了四个重组质粒。用脂质体将重组慢病毒载体转染293T细胞后，选择沉默效率高的质粒载体进行慢病毒颗粒大量包装。用脂质体将重组慢病毒载体与病毒包装载pHelper1.0、
pHelper2.0共转染293T细胞生产慢病毒颗粒，用慢病毒颗粒感染前列腺癌细胞株LNCaP和PC3后，用定量PCR检测SMO基因mRNA；细胞增殖实验检测细胞增殖的变化；用流式细胞仪检测转染效率和细胞周期的变化。测序结果证明4个重组慢病毒质粒载体插入序列完全正确，其中pGCSIL-GFP-723的干扰效率最高，后用Lv-SIL-SMO723命名该载体。用Lv-SIL-SMO723慢病毒颗粒感染前列腺癌细胞株LNCaP和PC3。其中LNCaP和PC3 SMO mRNA显著下调，LNCaP细胞生长明显减缓，S期细胞减少、G2/M期细胞增多，与未转染病毒、转染阴性对照病毒的LnCap细胞比较有
显著差异( P < 0.05) 。但对PC3细胞增殖没有改变（P > 0.05）。综上所述，本研究成功构建了特异性沉默SMO基因慢病毒载体，其产生的慢病毒颗粒能特异地沉默SMO基因，抑制LNCaP细胞增殖，但对PC3无作用。

关键词：慢病毒属, 前列腺肿瘤, RNAi, 理顺