《亚洲男性学杂志》 2016; 18 (4): 620-626
【原创论文】Claudin 11和occludin是在体外支持细胞紧密 连接的功能的主要贡献者 支持细胞的紧密连接是血睾屏障的重要组成部分, 它使生 精小管与正在进行精子生成的生殖细胞相互隔离。 受激素调节 的claudin 11是具有屏障功能的重要跨膜蛋白, 敲除claudin 11可 导致不育。 本研究目的是在体外使用的siRNA介导的基因沉默定 量地评价蛋白Claudin 11在紧密连接中的作用。 我们还研究了另 一种跨膜蛋白在紧密连接中的作用。 claudin 11和/或occludin的基 因沉默在幼鼠睾丸支持细胞培养模型中进行。 跨上皮电阻被用 来定量评估细胞培养中紧密连接的功能。 siRNA处理后两天, 将 细胞固定后使用免疫荧光法对连接蛋白的进行定位或裂解后RTPCR评估mRNA的表达。 沉默claudin 11, occludin, 或两者的沉 默分别导致导致精密连接55%( P<0.01) , 51%( P<0.01) , 62%( P<0.01) 功能的显著下降。 同时, 靶蛋白在支持细胞的紧 密连接中的mRNA以及定位蛋白表达显著降低。 定量数据表明, claudin 11在体外对支持细胞的紧密连接意义重大( P<0.01) , 有 趣的是, 受激素调节的occludin在成年后期才与不育相关, 其也 对屏障功能有显著的影响( P<0.01) 。 我们的数据与体内研究的 结论一致, 清楚地表明这些蛋白质在维持正常的紧密连接的屏障 结构和功能中发挥重要作用。 关键词: 血睾屏障; Claudin 11; occludin; 支持细胞紧密连接; siRNA |