《亚洲男性学杂志》 2009; 11 (6): 703-709

参数正常和无精子症精液游离DNA的快速提取与一般特征：遗传研究及诊断的无创性途径

我们建立了一种基于DNA纯化柱的快速可靠的提取精浆游离DNA（cell-free seminal DNA, cfsDNA）的方法,对于同一标本，三次提取D N A量的差异低于15%，表明该方法重复性好。对于分别用超滤和离心所获取的精浆，所提取的DNA的量和片段分布基本相同，证实了精浆中游离DNA的存在。为研究cfsDNA一般特征，我们分别用荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳分析了参数正常和无精子症精液中cfsDNA的含量和片段分布。参数正常精液（n = 11）cfsDNA含量为1.34 ± 0.65 μg mL-1，无精子症患者cfsDNA含量高于参数正常精液（2.56 ± 1.43 μg mL-1, n = 9, P < 0.05)。cfsDNA片段分布包括了从～1 kb到15 kb的不同大小DNA片段，及180 bp和其倍数的DNA条带，在一些无精子症患者c f s D NA中可见明显的“DNA梯子”，提示cf s D NA部分来源于凋亡细胞。选择了36例已知Y染色体微缺失信息的无精子症患者，提取cfsDNA用于多重PCR及常规PCR分别检测Y染色体微缺失和扩增sY114位点（1 450 bp），所有PCR反应均扩增成功，Y染色体微缺失与外周血结果相同。本实验结果提示cfsDNA是寻找男性生殖系统疾病研究手段和诊断分子的无创性途径。

关键词：无精子症，游离DNA，正常精液，精浆，Y染色体微缺失